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細胞在液氮罐保存方法及步驟

時間：2019-11-12 09:06:35 來源：作者：admin

隨著科技的進步成都金鳳液氮罐也被眾多領域所應用，不管是生活中還是生產(chǎn)中都能看到它的身影，如醫(yī)療行業(yè)，生物醫(yī)學行業(yè)，金屬生產(chǎn)行業(yè)以及精密儀器等。今天為大家介紹的是細胞在液氮罐保存方法及步驟

一、液氮罐的應用范圍及用途

1.在生物醫(yī)學行業(yè)中的應用：目前主要是用于牛、羊等優(yōu)良種公畜以及珍惜動物的精液保存，以及遠距離的運輸和醫(yī)學中的疫苗、菌毒種、細胞以及人、動物的器官等浸泡于成都金鳳液氮罐儲存的液氮中，長期活性保存。

2.在金屬生產(chǎn)行業(yè)中的應用：利用成都金鳳液氮罐中儲存的液氮對金屬材料進行深冷處理，可以改變金屬材料的金相組織，顯著提高金屬材料的硬度、強度和耐磨性能。

精密儀器電子行業(yè)中的應用：將精密零件經(jīng)過液氮深冷處理后進行裝配，提高零件裝配質(zhì)量，從而提高設備或儀器的整機性能。

3.醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)的應用：用液氮容器內(nèi)儲存的液氮作為制冷劑進行手術，治療或冷藏冷凍細胞、組織等。冷療儀用于醫(yī)院臨床各科室能夠代替手術，安全無毒，無害痛苦少，不損害健康組織，殺菌效果良好。

4.美容領域的應用：主要用液氮的超低溫來處理皮膚表層。如采用手術治療，疤痕往往是不可避免的后遺性缺陷，而冷凍治療卻不會出現(xiàn)這些情況，而且效果也比較理想。

二、細胞在液氮罐保存步驟：

怎么在液氮罐里儲存細胞呢?一般來講，凍存細胞的步驟會影響到細胞復蘇時的活力，所以在使用液氮罐儲存細胞時應小心并按步驟操作：

1、預先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預冷;

2、用胰酶對細胞進行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞(盡可能溫和);

3、再次用完全培養(yǎng)液懸浮細胞，將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中，用滴管輕輕吹打混勻。

4、在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期。

5、凍存步驟的細致直接關系到細胞復蘇時的活力，如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐最好;或者可以在4℃，2h;

三、細胞在液氮罐的儲存分為兩種：

液氮罐里一般灌有低溫液氮，細胞的儲存需要低溫環(huán)境，放入-196度的液氮里對細胞是長期保存的一個適合的環(huán)境。常規(guī)液氮罐是將細胞存入液氮罐的液相里儲存，有專用的方形抽屜式提籃，2ml凍存管放入凍存盒然后再放入提籃后浸入液氮里，完全浸入。使細胞完全處于液氮-196度環(huán)境下，才能夠長期保存細胞。

還有一種是氣相儲存，氣相儲存的話，溫度比液相儲存要高一些，不過也能達到-190度，對于細胞儲存來講，也是足夠了的。而且還能解決長期以來液相儲存細胞經(jīng)常出現(xiàn)而又難以避免的一些問題，比如樣品污染，出罐爆管等等。相對來說，液相液氮罐相比氣相來說，相同體積的液氮罐保存的時間也久一些.氣相凍存的溫度稍微高一些,但相同體積的液氮罐保存的時間短一些(液氮量少,所以加液氮的頻率要高一些).氣相需要頻繁加液氮。

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